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上海美迪西生物医药有限公司成立于2004年,位于上海张江高科技园区和上海川沙经济园区,是一家综合性的生物医药研发服务公司。目前公司拥有30000 平方米的研发实验室和国内一流的仪器设备。公司科研中坚力量由几位经验丰富的华裔博士和在美国制药领域工作多年的企业管理人士组成。公司现有员工800余人,约50%拥有博士学位或硕士学位,超过10%的员工拥有国外教育背景和/或工作经验。

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小鼠肉瘤肿瘤模型生长规律及热休克蛋白的表达  

2015-12-18 13:39:38|  分类: 默认分类 |  标签: |举报 |字号 订阅

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美迪西根据客户的需求提供各种有效的动物模型,用来检测药物的有效性。实验动物有非人类灵长动物、狗、小鼠、大鼠、家兔、豚鼠、裸鼠等各种种类。目前,我们已经建立多个有效动物肿瘤模型,并经过多方验证和长期实践考验。同时,我们员工丰富的经验与雄厚的理论基础能够灵活地根据客户的定制要求开发建立各种定制肿瘤模型以满足客的需求。

(联系我们:www.medicilon.com Emailmarketing@medicilon.com.cn

摘要 : 目的 :研究 Balb/ C小鼠 S180 肉瘤细胞接种后肿瘤发生及生长规律以及不同热休克蛋白 (heat shock protein , HSP) 在小鼠 S180 肉瘤细胞中的表达 , HSP 的分离、纯化及免疫治疗提供可用的动物模型。 

方法 :三组不同剂 S180 肉瘤细胞(10 万个、100 万个、500 万个) Balb/ C小鼠背部皮下接种 ,观察肿瘤发生率、肿瘤组织生长规律、 小鼠生存时间 ,取部分肉瘤细胞进行热休克处理后进行免疫组化观察。 

结果 :S180 肉瘤细胞接种 Balb/ C 小鼠的 肿瘤发生率为 100 % ,不同剂量的肿瘤生存期限差异有显著性意义 ,肿瘤大小无显著差异 ; HSP的免疫组化观察 表明 :HSP607090α、grp94 均为阳性表达 ,其中HSP60grp94 强阳性 ,热休克处理后 HSP70阳性增强 ,HSP90α阳性减 弱。结论 :Balb/ C小鼠 S180 肉瘤为观察 HSP 表达及提取、纯化提供稳定的动物肿瘤模型 ,还可用于进行 HSP 苗治疗肿瘤的实验研究。 关键词 : 肿瘤模型 ;热休克蛋白 ;  免疫组化

0          引言

随着热休克蛋白 (heart shock protein ,HSP) 提取、 纯化技术的日益成熟 ,以及抗肿瘤免疫基础理论的研 究进展 ,HSP/ 肽复合物对 T 细胞免疫的激活作用也 越来越得到重视1 6 。其中已有对 gp96/ 肽复合物免 疫治疗的临床Ⅲ期肿瘤实验观察 ,获得一定的临床效 7 ,8 。但 HSP/ 肽复合物在骨科肿瘤的临床及实验 研究尚少。我们通过对 Balb/ C 小鼠背部皮下注射 S180 肉瘤细胞 ,获得稳定的肿瘤模型 ,通过观察肿瘤组织生长以及 HSP 的表达规律 ,从而为 HSP 肿瘤免 疫治疗的进一步实验研究打下基础。 1 材料和方法 1. 1 瘤源  已建株的小鼠 S180 肉瘤细胞 ,由军事 医学科学院放射医学研究所王玉芝教授赠送。体内 培养 ,取腹水 ,液氮冷冻保存。 1. 2 主要试剂  抗鼠 HSP607090grp94 单抗 , 根过氧化物酶标记的羊抗鼠 IgG抗体、DAB (北京中 山公司) 1. 3 实验动物及分组  Balb/ C 小鼠 30 ,雌性 ,6 8 周龄 ,体重 18 g 左右 ,购自本院动物实验室 ,清洁级 喂养。按 S180 肉瘤细胞不同剂量随机分成三组 ,A :10 万个 ,B :100 万个 ,C :500 万个;S180 液氮 冷冻细胞悬液按一般细胞培养技术复苏、计数 ,锥虫 蓝染色 ,鉴定活细胞数 95 %。用 DMEM 培养液调整 至所需浓度后以 0. 1 ml 背部皮下注射。 1. 4 观察指标  观察每只小鼠肿瘤出现时间、生长 期间每 3 天用卡尺记录一次肿瘤大小、荷瘤鼠存活 天数 ;小鼠死亡后取瘤体 ,仔细去除表面增生血管、 被膜等其他结缔组织 ,称瘤体重量 ,肿瘤体积按公 :V = L ×W ×W/ 2 (L 为肿瘤最长径 ,W 为与 L 直的最宽径) 进行计算。 1. 5 免疫组化  另取 100 万个肿瘤细胞以 0. 1 ml 等渗盐水腹腔注射 , 2 周后已明显有腹水生长 , 射器抽出腹水后用等渗盐水洗涤 2 ,离心 ,去红细 ,分成加温组(42 ℃水浴 ,6 h) 和不加温组 ,以适合 浓度涂片 ,丙酮固定后以 ABC 法行 HSP607090α、 grp94 免疫组化染色 ,以不加一抗为阴性对照。 1. 6 统计学处理  采用 SPSS10. 0 软件包进行统计 分析 , Kaplan2Meier 法进行生存分析 ,小鼠存活时 间、肿瘤湿重和肿瘤体积生长曲线进行单因素方差 分析。

2 结果

2. 1 小鼠平均存活时间及组间差异  见表 1。大 剂量组在接种肿瘤细胞后生存时间明显短于小剂量 组。死亡原因均为肿瘤组织过度生长后营养消耗 , 或向脊柱、腹腔浸润生长 ,腹水生成 ,或脊髓损伤致 后肢瘫痪 ,并发症等。 

3 讨论

在小动物肉瘤模型的研究中 ,可以选择用物理 或化学方法诱导产生自发性肿瘤 ,但可能存在的问 题是致瘤率低 ,或致瘤条件不易控制而难以获得 ; 建株的移植性肿瘤模型生长条件要求较高 ,在不同 品系甚至同一品系不同遗传背景时都可能发生肿瘤 排斥 ;裸鼠虽然对肿瘤生长不会有排斥 ,但由于其免 疫系统功能的缺失而丧失了在肿瘤疫苗研究中的意 ,因此对肿瘤疫苗研究模型的选择并不简单。 S180 肉瘤建株最初应用于腹水肿瘤模型的研究 , 后作为移植性肉瘤模型逐渐在 NH (昆明) 小鼠、 Balb/ C 小鼠、C57BL/ 6 纯系小鼠、ICR 小鼠等各品系 小鼠中得到广泛应用 ,说明 S180 肉瘤种系差异小 , 适应性广。   

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