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药物安全性评价中实验动物临床检验分析  

2015-12-07 11:15:09|  分类: 默认分类 |  标签: |举报 |字号 订阅

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我们在药物安全性评价方面有专业的团队和实战经验,可提供高质量的数据和快速的周转期以支持各项药物安全评价研究。毒理学研究在不同的动物种类中开展,从剂量设计,实验研究到组织学和病理学研究包括临床检测均可按照非GLP或者GLP标准执行。我们的研究平台已被评为上海研发公共服务平台。

联系我们(www.medicilon.com.cn 邮箱:02158591500)

要:相对于药物安全性评价的临床研究,实验动物的临床检验指标存在一定的特殊性,应结合受试药物、动物表现、其 他实验结果及其他检测结果进行综合分析。结合相关理论及笔者的实践经验对这个问题进行简要分析与讨论,主要内容包括 建立实验室的正常参考值、如何排除非受试物因素对检验结果的影响、对结果的统计分析等综合分析的前提、综合分析的总 体思路与方法、如何对血液学指标、血液生化学指标及凝血指标进行具体分析。 关键词:药物安全性评价;实验动物;临床检验;综合分析

相对于药物安全性评价的临床研究,实验动物 临床检验存在一定的特殊性,应结合受试药物、动 物表现、其他实验结果及其他检测结果进行综合分 析。药物安全性评价研究

中实验动物临床检验包括了血 常规、血液生化、血凝、尿液、骨髓和免疫学等检 测指标。目前在药物临床前安全性评价中,特别是 在长期毒性试验中,有比较多的实验报告只是把临 床检验结果简单地罗列上去,有些只进行单个指标 的分析,而没有进行综合分析,致使得出误导性或 错误的结论,在药物技术审评中引起很大困难。因 此对于实验动物临床检验指标有必要进行综合性、 正确的分析,以排除非药物因素引起的异常情况。

1 综合分析的基础

1.1 检测指标的正常参考值范围 建立机构内的每个指标各种动物每个性别不同 年龄段的正常参考值范围,得以在动物个体分析 中判断是否超出正常参考值范围,是判断指标异常 的重要依据。

1.2 非受试物作用的因素排除 1.2.1 动物应激 即时的应激可引起白细胞、丙氨 酸氨基转移酶(ALT)和肌酸激酶(CK)等指标的 升高,长期的应激可使纤维蛋白原(FBG)等指标 升高[4] 1.2.2 年龄因素的影响 随着年龄的增长,大鼠血 液红细胞数(RBC)、血红蛋白量(HGB)及红细 胞压积(HCT)值升高,而血清 ALT、天门冬氨酸 氨基转移酶(AST)及总蛋白(TP)值也升高,而 血清碱性磷酸酶(ALP)、血糖(GLU)值降低。 1.2.3 采样方法、采样时间、样本制备等因素的影 实验动物不同的采样部位、动物采样的麻醉及 深度、动物保定方法、采样顺畅度及采样周围环 境、尿液和粪便收集方法都对多个检测指标有明显 的影响。动物禁食时间、一天内不同时间采血对 多个检测指标也有明显的影响。样本制备过程中,抗凝剂的选择和量、离心条件、溶血情况等对较 多的检测指标有影响。

1.2.4 样本保存的影响

采血过程中样本的保 存应消除不同组别血样保存时间的差异,清楚各种 样本的保存时间对检测结果的影响,如不同保存条 件和保存时间对血液学的多项指标有不同的影响, 血样离心前时间过长可引起血糖等指标的改变,血 清保存时间过长会使一些酶类活性降低,血浆在不 同条件下的保存时间对凝血指标也有明显影响。

1.2.5 检测过程的影响 检测过程中,试剂、质控 方法和标准物质的存放条件和时间,检测的外周环 境也会对检测结果造成一定的影响。

1.2.6 其他影响因素 血液学检测应使用有相关动 物参数的血液分析仪。粪便潜血检测应排除喂饲食 物的影响。 1.3 数据处理对分析的影响 非受试物产生的异常数据处理,可通过一般观 察、动物个体数据分析,动物给药前后的比较等方 法排除非受试物产生的异常数据,以排除这些异常 数据的干扰。数据的统计分析中,应选择合理的统 计方法,特别是一些半定量数据。 2 综合分析的思路 药物非临床安全性评价中临床检验指标的分析 主要分析检测指标异常的原因,这些指标的异常反 映了什么毒性或哪些组织器官的损伤,这种异常是 否由药物引起的,这种作用是否对临床有参考意义。

2.1 指标的升高 检测指标的升高有以下 3 种原因,应分别对待。 1)生成增加:自身调节的作用(如贫血引起网织 红细胞增高),药物的直接作用,如促红细胞生成素 EPO)引起红细胞(RBC)的升高,体内成分的降 解或分解引起降解产物的增加;(2)相对增加:血 液的浓缩使部分临床检验指标的升高,细胞内物质 溢出(如细胞内的酶溢出)等;(3)检测成分的降 解或分解减少、排出减少。 2.2 指标的降低 检测指标的降低有以下 5 种原因,应分别对待。 1)生成减少:药物的抑制作用,如对骨髓的抑制 使外周血细胞减少;(2)生成原料不足:如缺铁性 贫血,缺维生素(VitK 引起的部分凝血因子减少; 3)生成器官的损伤,如肝脏损伤引起的白蛋白和 部分凝血因子的减少;(4)药物的直接破坏作用, 如溶血作用;(5)检测成分的降解或分解增加、排 出增加。 2.3 实验动物的个体分析和整体分析 在药物安全性评价中,个别动物出现毒性也应 得到重视,因此个别动物出现检验指标的异常,应 结合本动物的其他结果进行综合分析,判断该异常 是否为受试物的作用。特别是在体型较大动物实验 中,因为动物数量少,动物个体数据分析显得更为 重要。在临床检验数据的整体分析中,注意统计学 意义和生理学意义的关系,是否有生理学意义要关 注正常参考范围,是否有其他相关指标或动物表现 的支持,这些指标异常对临床是否有参考意义。 2.4 结合药物的特点分析 注意药物的药理作用的放大,同类药物或结构 相似药物的毒性作用特点。 2.5 结合动物的临床表现分析 很多临床检验指标的异常可被一般观察指标给 予验证或排除其生物学意义。如动物黏膜颜色与贫 血,皮肤黏膜观察与过敏指标,动物活动与组织器 官损伤指标等。又如动物产生局部感染而引起白细 胞的升高,而这种感染是否是受试物的作用;如果 不是,则白细胞升高不是药物的作用。受试物引起 动物呕吐、腹泻,则由呕吐、腹泻而产生的电解质 絮乱也为药物作用所致。 2.6 结合病理及其他检查结果分析 组织病理学从组织器官的形态学方面进行评 价,而临床病理学从功能方面进行评价,和临床病 理学间存在互相验证的关系;但两者不存在必然的 因果关系。因为有组织病理学损伤的器官有不同的 代偿作用,而临床病理学检测物质较多有较快的代 谢或排出,药物安全性评价试验中动物组织病理学 一般损伤较慢,需要有较长的恢复期,因此组织病 理学损伤和临床病理学异常,在很多情况下可观察 到结果不同步。 2.7 结合其他实验分析 药物代谢和毒物代谢结果、刺激性和过敏性结 果也对实验动物临床检验指标有影响。因为药物的 靶向分布与该器官组织的异常指标可相互支持。药 物的血药浓度参数、蛋白结合率和蓄积性对临床检 验指标的分析也起重要的作用。刺激性和致敏性可 引起动物应激及一些组织器官的损伤,使部分指标 升高。 3 血液学指标的综合分析 血液学指标包括红细胞系和白细胞系及其分类,红细胞系包括数量及形态的检测。红细胞系的 数量参数有 RBC、血红蛋白(HGB)、平均血红蛋 白量(MCH)、平均血红蛋白浓度(MCHC)、血小 板数(PLT)、网织红细胞数(RET)等,而形态指 标有平均红细胞体积(MCV)和红细胞分布宽度 RDW)等指标。 进行血液学分析时要注意以下 3 个方面。(1 红细胞系通过数量参数与形态参数结合进行分析, 白细胞结合数量及其分类情况进行分析。(2)结合 参数图进行分析,以清楚 RBC 是否干扰 PLT 的计 数,白细胞分类图中各群细胞是否有重叠,特别是 受试物对血液学有毒性时,必要时应对白细胞进行 人工分类。(3)清楚各种动物血细胞产生的动力学 和寿命。各种细胞生成和成熟的组织器官,在正常 生理或病理条件下的寿命,以红细胞的寿命为例, 100120 d、大鼠 4568 d、小鼠 2045 d 4 血生化指标的综合分析 血液生化学指标包括了血清酶类,蛋白、血脂、 血糖、酸碱平衡类和代谢物类共 3大类,通过这些 指标的检测能推测组织器官的损伤或功能异常。 1ALTASTALPCK 等血清酶指标,分 析时注意各组织器官中各种酶的量,升高或降低的 原因,酶代谢的快慢,各种酶对组织损伤的敏感性 和特异性。(2TP、白蛋白(ALB)、三酰甘油(TG)、 总胆固醇(TCHO)、GLUK+ Na+ Cl? 等蛋白、 血脂、血糖、酸碱平衡类指标,分析时要清楚其代 谢过程,包括吸收、生成或合成、代谢部位及代谢 途径。(3)肌肝(CR)和尿素氮(BUN)等代谢物 指标,分析时要清楚其产生原因、主要排出途径, 用以检测肾脏的敏感性。 5 血凝筛选指标的综合分析 血凝筛选指标包括 PTAPTTTTFBG 及凝 血因子[15]。分析时要清楚凝血过程和检测原理,凝 血因子的生成和代谢、生成原料、生成部位。通过 凝血功能的检测,以发现其减少或增加,并分析其 改变的原因。受试物是否直接作用于凝血因子、生 成部位或原料不足(如 VitK)。FBG 为急性时相反 应蛋白,炎症应激等可升高,常有消耗性降低。

6 结语 本文结合笔者多年从事动物实验工作的经验, 简要论述了药物安全性评价研究中实验动物临床检验指 标综合分析的基础,包括建立分析背景数据、保证 数据的可靠可信和科学统计,综合分析的总体思路, 并以血液学、血液生化和血凝为例说明分析的注意 事项和具体分析思路,以期更加客观地分析实验结 果,提高药物安全性评价研究水平。

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