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上海美迪西生物医药有限公司成立于2004年,位于上海张江高科技园区和上海川沙经济园区,是一家综合性的生物医药研发服务公司。目前公司拥有30000 平方米的研发实验室和国内一流的仪器设备。公司科研中坚力量由几位经验丰富的华裔博士和在美国制药领域工作多年的企业管理人士组成。公司现有员工800余人,约50%拥有博士学位或硕士学位,超过10%的员工拥有国外教育背景和/或工作经验。

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药物筛选方法、用于促进胞外基质交联的药物及其应用  

2016-12-20 13:54:40|  分类: 默认分类 |  标签: |举报 |字号 订阅

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美迪西拥有一支超过百余名的化学家队伍,有着和国内外知名的大型制药公司和生物技术公司进行新药研发合作的经验。在国际知名和经验丰富的药物化学领军人才的领导下,美迪西为客户提供涵盖各种靶标和疾病领域的新药研发服务,包括从活性化合物发现, 靶标验证,先导化合物优化到临床前候选药物的选择。邮箱:marketing@medicilon.com.cn 网址:www.medicilon.com

技术领域:本发明涉及医药领域,尤其涉及一种药物筛选方法、用于促进胞外基质交联的药物及其应用。

背景技术:弹性纤维为多种器官提供弹性,而胶原蛋白为机体提供支撑作用。现在已知,弹性纤维交联度的降低会导致一系列的结缔组织的病变,例如皮肤松弛、肺气肿、心血管异常、血管增生诱发的视网膜黄斑退变、性器官脱垂及尿失禁。这些病变均属老年性慢性病,虽然不致死但大大影响人们的生活质量。因此,探索提高机体的弹性纤维的维护是提高人们生活质量的重要手段。

弹性蛋白多聚体沉积是弹性纤维维持交联度的一个重要因素,早于20042006年,Liu及其同事发现赖酰基氧化酶1是特异地维护机体弹性纤维的发育及其更新的关键因子。没有L0XL1直接特异性地影响弹性纤维的交联形成,进而导致一系列的动态结缔组织的病变,包括皮肤松弛、肺气肿、心血管异常、血管增生诱发的视网膜黄斑退变、性器官脱垂及尿失禁。进一步研究发现,随着组织器官的老化,L0XL1的水平大大降低,并伴随着弹性纤维交联度的下降及弹性蛋白单体无序堆积的增力口。

但是,现有技术还有没有出现一种药物筛选方法,能用于筛选出对L0XL1蛋白的表达水平或活性有效促进作用的物质。

发明内容:鉴于上述现有技术的不足,本发明的目的在于提供一种药物筛选方法、用于促进胞外基质交联的药物及其应用,旨在解决现有技术中没有方法能有效筛选出能用于筛选出对L0XL1蛋白的表达水平或活性有效促进作用的物质的问题。

本发明的技术方案如下:

一种药物筛选方法,用于筛选出对L0XL1基因表达有促进作用的物质,其中,所述药物筛选方法中,包括以下步骤:

A、构建由人L0XL1基因启动子控制表达ZsGreen的二代慢病毒载体:将人L0XL1基因启动子片段克隆到慢病毒载体pLVX-ZsGreen上,并将慢病毒载体pLVX-ZsGreen上原有的CMV启动子置换下来,得到二代慢病毒载体pLenti-P^u-ZsGreen,所述二代慢病毒载体pLenti-Pm-ZsGreen含有由人L0XL1基因启动子控制表达ZsGreen的元件PLoxLi-ZsGreen

B、用二代慢病毒载体感染人成纤维细胞,构建整合有PMXU-ZsGreen元件的人成纤维细胞;

c、药物筛选:将所述整合有Pm-ZsGreen元件的人成纤维细胞接种于培养基中,贴壁过夜;将待测物质溶解于DMS0中并加入到人成纤维细胞的细胞培养基中;经过培养后,检测人成纤维细胞的绿色荧光强度,通过检测绿色荧光强度是否增加来判断待测物质对L0XL1基因表达的促进作用。

所述的药物筛选方法,其中,所述步骤B的具体过程为:

将二代慢病毒包装体系包装并浓缩成滴度不低于lxlo7/ml的病毒颗粒,按1:100稀释,用于感染细胞密度为20%的人成纤维细胞,经流式分选仪筛选出稳定整合有PIOXLl_ZsGreen元件的人成纤维细胞系。

所述的药物筛选方法,其中,所述步骤C中,所述待测物质是以0.2-2mg/ml溶解于DMSO中;所述细胞培养基中待测物质的最终浓度为1-10μg/ml

一种用于促进胞外基质交联的药物,其中,所述药物中包含有对L0XL1基因表达有促进作用的物质,所述物质为采用如上所述的药物筛选方法筛选所得。

所述的用于促进胞外基质交联的药物,其中,所述药物包括蕲蛇、大青叶、三尖杉、白芥子、白术、甘草、瓜萎、冬瓜皮、桑葚、米召、白前、马勃、月季花、儿茶、玫瑰、生地、泽兰、黄柏、老鸹草、藿香、佩兰、芥子、益母草、茺蔚、木蝴蝶、防己、五味子、刺葵藜、川贝、土茯苓、王木留、郁金、红景天或大黄素中的一种或多种。

一种如上所述的用于促进胞外基质交联的药物的应用,其中,将所述用于促进胞外基质交联的药物用作化妆品添加剂、食品添加剂,或用于制备治疗或改善因动态结缔组织病变所致的疾病的药物。

有益效果:本发明中提供了一种能用于筛选对人L0XL1启动子的活性和L0XL1的表达量有促进的药物的方法,此方法操作简单,而且本发明还具有广泛的适用性。本发明中通过对上千个中药提取物及化学小分子的筛选,发现了一系列能提高衰老的人成体细胞中L0XL1水平的中草药抽提物及小分子。这些物质都能有效地促进人L0XL1启动子的活性和L0XL1的表达量,从而促进胞外基质蛋白的交联,胞外基质蛋白包括但不局限于弹性蛋白和胶原蛋白。因此,可将所述用于促进胞外基质交联的药物用作化妆品添加剂、食品添加剂,或用于制备治疗或改善因动态结缔组织病变所致的疾病的药物。

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