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上海美迪西生物医药有限公司成立于2004年,位于上海张江高科技园区和上海川沙经济园区,是一家综合性的生物医药研发服务公司。目前公司拥有30000 平方米的研发实验室和国内一流的仪器设备。公司科研中坚力量由几位经验丰富的华裔博士和在美国制药领域工作多年的企业管理人士组成。公司现有员工800余人,约50%拥有博士学位或硕士学位,超过10%的员工拥有国外教育背景和/或工作经验。

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一种复制缺陷性重组腺病毒及其制备应用  

2016-10-21 11:15:45|  分类: 默认分类 |  标签: |举报 |字号 订阅

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美迪西根据客户的需求提供各种有效的动物模型,用来检测药物的有效性。实验动物有非人类灵长动物、狗、小鼠、大鼠、家兔、豚鼠、裸鼠等各种种类。目前,我们已经建立多个有效动物肿瘤模型,并经过多方验证和长期实践考验。同时,我们员工丰富的经验与雄厚的理论基础能够灵活地根据客户的定制要求开发建立各种定制肿瘤模型以满足客的需求。邮箱:marketing@medicilon.ocm.cn 网站:www.medicilon.com.cn

摘要:本发明提供了一种复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCS1及其制备方法,本发明的强化因子为沉默细胞因子信号抑制因子1SOCS1)的重组复制缺陷型腺病毒rAd-sh-RNA-SOCS1;感染DCs后采用肿瘤特异的CTL表位多肽脉冲DCs使其成熟为mDCs,再然后与自身外周血体外扩增的CIK细胞共培养,它们之间的相互作用大大强化了对肿瘤细胞的特异性杀伤,突破机体对肿瘤细胞或病毒感染细胞的免疫耐受,在小鼠肿瘤模型的治疗性实验中,具有良好的治疗效果。此外,该病毒感染的DC细胞也可以与其他免疫效应细胞,如CTLNK、γδTTIL细胞等,联合用于肿瘤,包括但不限于宫颈癌的治疗。

为了克服现有技术的不足,本申请提供了一种强化树突状细胞-免疫效应细胞治疗肿瘤的方法,该方法为复制缺陷型重组腺病毒rAd-RNAi-SOCSlDC-免疫效应细胞对肿瘤的杀伤作用的方法,具体而言,本发明提供了一种复制缺陷型重组腺病毒 rAd-RNAi-SOCSl及其制备方法和用该病毒强化DC-效应免疫细胞在治疗肿瘤中的用途。本发明以宫颈癌为研究对象,也适用其他肿瘤的治疗。效应细胞在本发明中为细胞因子杀伤细胞(cytokine-induced killers, CIKs),也适应 NKCTL 等细胞。

本发明的技术方案如下:一种复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCSl,该制缺陷 性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCSl表达如下序列的双链RNA :

5 ' -GATCCCTACCTGAGTTCCTTCCCCTTCAAGAGAGGGGAAGGAACTCAGGTAGTTTTTTG-3 '

5 ' -AATTCAAAAAACTACCTGAGTTCCTTCCCCTCTCTTGAAGGGGAAGGAACTCAGGTAGG-3

所述复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCSl的表达系统为Adeno-X

所述复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCSl感染树突状细胞(DCs),并使细胞内 SOCSl表达沉默。

所述复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCSl感染DC后,用合成的HPV16E7. 49-57 表位多肽脉冲被腺病毒感染的DCs,用TNF-α使DCs成熟,与自身外周血体外扩增的CIK 胞继续共培养后一周回输体内,对肿瘤细胞进行特异性杀伤。所述复制缺陷性重组腺病毒 rAd-RNAi-SOCSl感染DC后,也可以与其他免疫效应细胞CTLNK、γ δ TTIL细胞联合 使用治疗肿瘤。

所述复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCSl的制备方法如下:

1)将所述双链RNA的编码DNA插入Adeno-X表达系统的RNAi-Ready pSIRN-Shuttle的多克隆位点,得到重组表达载体RNAi-SOCSl-pShuttle ;

2)PI-Sce II-Ceu I双酶切所述重组表达载体RNAi-SOCSl-pShuttle,将得 到的含有所述双链RNA的编码DNA的酶切片段与Adeno-X表达系统的Adeno-X病毒DNA 接,将得到的连接产物转化大肠杆菌DH5 α感受态细胞,得到重组腺病毒DNA,再将该重组 腺病毒DNA转染ΗΕΚ293细胞,得到复制缺陷型重组腺病毒。

所述复制缺陷性重组腺病毒rAd-RNAi-SOCSl在治疗宫颈癌中的用途。

本发明为了突破机体对肿瘤的免疫耐受,选用诸如IFN- YIL-2IL-7IL-12 IL-15等细胞因子的负调节因子S0CS1为靶标,用RNA沉默技术(RNA silencing)使S0CS1 基因沉默,然后将其转入腺病毒载体中构建成重组腺病毒rAd-RNAi-SOCSl。将重组腺病毒 rAd-RNAi-SOCSl感染分离培养的DCs,然后合成的HPV16E7. 49-57表位多肽脉冲被腺病毒 感染的DCs,用TNF-α使DCs成熟,与CIK细胞继续共培养后一周回输体内,对荷瘤的个体 产生强烈的免疫反应,突破机体对肿瘤细胞或病毒感染细胞的免疫耐受,在小鼠肿瘤模型 的治疗性实验中,具有良好的治疗效果。

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