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恒河猴痫性发作模型及其药物筛选方法  

2017-02-10 11:01:31|  分类: 默认分类 |  标签: |举报 |字号 订阅

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美迪西普亚提供的药物安全评价Package研究资料向CFDA、美国FDA、澳大利亚TGA申报InvestigationalNewDrug(简称IND)15次,用美迪西普亚提供的非临床药物安全评价单项研究资料向CFDA、美国FDA、澳大利亚TGA申报Investigational New Drug (简称IND) 60余次。邮箱:marketing@medicilon.com.cn  网站:www.medicilon.com.cn

本发明提供了一种制备恒河猴痫性发作模型的方法,它是将剂量为0.5ml/kg-0.7ml/kg的马桑内酯施用于恒河猴诱发痫性发作。本发明还提供了该动物模型在筛选痫性发作治疗药物中的用途。相对于其它的颞叶癫痫模型,本研究具有以下优点:1、采用肌肉注射的途径系统给药,易操作;2、致痫剂量与动物性别、年龄相关不大;3、重复性好;4、电极安置方便;5、对脑没有直接的机械损伤;6、致痫过程清晰;7、药物安全性好。

痫性发作是大脑神经元异常放电引起的发作性脑功能异常。发作大多短暂并有自限性,由于异常放电所累及的脑功能区不同,临床可有多种发作表现,包括部分性或全面性发作,具体表现为运动、感觉异常,或是行为认知、植物神经功能障碍。全面性发作和复杂部分性发作,往往伴有程度不同的意识障 碍。

癫痫是神经元的过度同步异常放电,其发生机制主要是脑内兴奋与抑制机制失衡,即一方面是脑内兴奋机制增强,一方面是抑制机制减弱。前者通过脑内兴奋性氨基酸介导,主要有谷氨酸和天冬氨酸,它们合成后贮存与神经末梢的囊泡内,依赖钙离子释放,释放后与突触后膜N-甲基-D-天门冬氨酸盐(NMDA)受体结合后,打开离子通道,钠离子、钙离子内流产生去极化。后者通过抑制性氨基酸r-氨基丁酸(GABA)介导,GABA释放出来与其受体结合后,氯离子通道打开,氯离子内流使突触后膜超极化。目前癫痫的动物模型按照发作情况被分为两类,一类是痫性发作的动物模型,即急性模型,指单次实验操作诱发的一次性急性发作,一类是癫痫发作的动物模型,即慢性模型,指维持一段时间反复自发性发作,模拟人类癫痫发作的临床和脑电图特征,按照发作表现分为:急性单纯部分性发作,慢性单纯部分性发作,复杂部分性发作,全面强直阵挛发作,失神发作,癫痫持续状态,难治性癫痫;按照发生机制分为:遗传性癫痫模型,癫痫免疫模型,外伤性癫痫模型,皮质发育障碍动物模型;按照制备方法分为:化学药物模型,金属植入,电刺激等。难治性癫痫病因和发病机制复杂,发作无预见性,发作程度难以控制。目前主要通过建立难治性癫痫动物模型探讨其发病机理、耐药机制以及筛选鉴定新的抗癫痫药物。

模型应具备以下特点:(1)发作类型与临床耐药性癫痫的发作类型相似;(2)模型具有脑部的阵发性异常放电,并可以从电生理方面评价药物疗效;(3)AED不能满意控制其发作;(4) 模型动物能存活较长时间。

国际上唯一被认可的耐药性癫痫模型是由Loscher等建立的大鼠耐苯妥英钠杏仁核电点燃模型,但是该模型的缺点是:操作复杂,动物不易饲养,点燃率低,容易死亡,耐药谱窄,对大鼠脑组织有机械损伤。研究得比较多的颞叶癫痫模型为海人酸模型和匹罗卡品模型。海人酸是兴奋性氨基酸,研究表明海人酸单位致痫剂量和致痫造成的损害程度随大鼠的品种和性别而异;匹罗卡品是毒蕈碱样激动剂,致痫剂量的匹罗卡品有明显的副作用,且产生严重的神经病理改变,已经远远超过了人类颞叶癫痫的病理改变。

痫性发作和癫痫是完全不同的两个概念,前者是指发作性皮层功能异常所引起的一组临床症状,而后者是指临床呈长期反复痫性发作的疾病过程。各种痫性发作,即可在癫痫患者,也可在许多急性疾患中表现。

早在七十年代从临床和动物实验中观察到中药马桑寄生的有效成分一马桑内酯(CL)具有治疗精神分裂症的作用,同时也可引起惊厥。至今国内外研究者用马桑内酯作为致痫剂,已经采用不同的给药途径和方式在多种动物身上建立急性癫痫模型、慢性点燃模型、离体海马脑片痫性放电模型,并广泛应用于癫痫发生机制研究和抗癫痫药物的筛选,结果表明马桑内酯所致癫痫与临床颞叶癫痫发作类型相似,抗癫痫药不能满意控制其发作,具有建立过程简单、点燃率高、没有机械损伤等优点,是一种较好的耐药性癫痫模型。灵长类动物与人的亲缘关系最近,国内外至今仍无恒河猴马桑内酯癫痫模型的相关报道,也没有采用马桑内酯构建痫性发作动物模型且用于筛选治疗痫性发作药物的相关 报道。

发明内容

本发明的技术方案是提供了马桑内酯在制备恒河猴痫性发作模型的药物中的用 途。

本发明提供了马桑内酯在制备恒河猴痫性发作模型的药物中的用途。

其中,所述的药物是制备急性痫性发作模型的药物。所述的动物模型是癫痫耐药 动物模型。

本发明还提供了一种制备恒河猴痫性发作模型的方法,它是将剂量为0.5ml/kg-0.7ml/kg的马桑内酯施用于恒河猴诱发痫性发作。进一步优选的马桑内酯的剂量为 0.7ml/kg

其中,所述的动物模型在筛选治疗癫痫的药物中用途。

本发明还提供了一种筛选治疗痫性发作药物的方法,它包括如下步骤:

a、用马桑内酯建立痫性发作的动物模型,作为对照;

b、将候选药物与马桑内酯一起施用于实验恒河猴;

C、观察候选药物抑制马桑内酯引起的模型动物痫性发作的发作情况,并进行评分,评价潜在的治疗痫性发作的药物。步骤c所述的药物是治疗急性癫痫的药物。a步骤所述的动物模型是癫痫耐药动 物模型。a步骤所述的动物模型的制备方法是将剂量为0. 5ml/kg-0. 7ml/kg的马桑内酯施 用于恒河猴。

进一步优选地,所述的马桑内酯的剂量为0. 7ml/kg

本发明选择了与人类亲缘关系最近的灵长类动物-恒河猴作为受试对象,初步建立急性痫性发作模型,观察行为学及脑电图改变。实验结果表明,实验组的3只恒河猴在大腿肌肉注射马桑内酯后10.33+/-0.58分钟,均发生了由部分性发作发展到全面强直_阵挛发作即1-5级的痫性发作,且用脑电图记录到不同时期的痫性放电,再次证实了马桑内酯在灵长类动物的致痫作用。本次实验,恒河猴经历了由运动减少,伴咀嚼的口咽自动症,唾液分泌增加,恶心呕吐等植物神经症状,逐渐发展到单侧肢体的抽搐,间断的“湿狗样抖动”,再到四肢抽搐,最后到全面强直_阵挛发作的全过程,发作形式与人类颞叶癫痫极为相似。

脑电图记录采用额F3F4,中颞T3T4四个电极记录,以Cz为参考电极,注射马桑内酯后3-5分钟脑电图开始出现变化,频率增加,波幅增高,但是未见咀嚼、恶心、呕吐等行为学表现,分析原因是运用氟哌啶醇控制猴躁动,对早期的脑电图和行为学表现如咀嚼、呕吐等有一定的抑制作用。7分钟开始四个电极均记录到明显的痫性放电,从猴单个肢体的抽搐到全面强直_阵挛发作的过程,痫性放电逐渐增多,波幅逐渐增高,双侧同步对称,发作后脑电抑制明显,2-3分钟后波幅恢复如前,仍可见散在痫性放电,1. 5-2小时后恢复至基 础波。

相对于其它的颞叶癫痫模型,本研究具有以下优点:1、采用肌肉注射的途径系统给药,易操作;2、致痫剂量与动物性别、年龄相关不大;3、重复性好;4、电极安置方便;5、对脑没有直接的机械损伤;6、致痫过程清晰;7、药物安全性好。

恒河猴饲养于国家成都中药安全性评价中心普通动物房,实验前动物适应环境并进行驱虫治疗,选择健康(雌性须未孕)动物作为受试动物,不锈钢猴笼分笼饲养,饲养条件符合国标GB14925-2001,室温1826 °C,相对湿度4070 %。猴精饲料喂养,自来水装瓶 自由饮用,每日喂饲水果。

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