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美迪西生物医药

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上海美迪西生物医药有限公司成立于2004年,位于上海张江高科技园区和上海川沙经济园区,是一家综合性的生物医药研发服务公司。目前公司拥有30000 平方米的研发实验室和国内一流的仪器设备。公司科研中坚力量由几位经验丰富的华裔博士和在美国制药领域工作多年的企业管理人士组成。公司现有员工800余人,约50%拥有博士学位或硕士学位,超过10%的员工拥有国外教育背景和/或工作经验。

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重组仙台病毒载体的纯化方法  

2017-02-28 15:56:20|  分类: 默认分类 |  标签: |举报 |字号 订阅

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美迪西生物医药是一家从事临床前研究外包服务(CRO)的公司,专门为客户提供可定制的临床前试验服务方案,拥有十余年研发技术经验积累,在药物代谢、药代动力学、药效研究,以及毒理学方面有专业的知识。为您提供高质量的数据和快速的周转期以支持各项药物开发、临床前研究和临床研究。帮您选取最有价值的候选药物投入临床试验应用阶段。美迪西临床前研究服务有药物代谢动力学、疾病移植动物模型、药物安全性评价三大部分组成。涵盖各个方面:方案设计、体内研究、样品分析、专业数据分析、IACUC审查等,以及申报资料准备。Email:marketing@medicilon.com.cn Web:www.medicilon.com.cn

本发明提供了一种重组仙台病毒的纯化方法,其过程是将收集的病毒初始液与来源于动物的红细胞在低温下混合一定的时间,然后在低温条件下低速离心,收集沉淀;沉淀再用洗液洗涤,洗涤后的沉淀在37℃温浴一定的时间,然后在室温条件下低速离心,收集上清液即为病毒纯品。

本发明属生物医药技术领域,涉及重组病毒载体的纯化方法,更具体是应用于重组仙台病毒纯化。

基因治疗是当今最具发展前景和发展最快的前沿生物技术之一。研究结果表明很 多疾病都是由于直接或间接原因基因自身出现异常及功能障碍导致的。随着人类基因组的 解析,有关疾病与基因关系的信息越来越多。基因治疗就是把与疾病有关的基因制成药剂 导入患者体内,达到治疗疾病的目的。这是一种尖端信息快速转为实用化的最新医疗技术。 —般的基因治疗载体,进入到细胞核内作为DNA来表达目的基因所编码的蛋白。 在细胞核内有整合到靶细胞的染色体上,或者与染色体DNA发生基因重组的危险。有报告 表明,虽然发生频率极低,但逆转录病毒载体有诱发白血病的可能。另外,已知腺相关病毒 载体在被整合的染色体附近,可引起局部的不可逆性的染色体结构变化。因此,在使用这些 载体时必须慎重考虑利弊问题。仙台病毒载体是细胞质型RNA载体,对各种动物细胞有较 高的感染效率;它本身不进入细胞核内,在细胞质中进行基因表达,在理论上不存在改变细 胞核内染色体的危险性,与其他载体相比具有更高的安全性。从根本上解决以往载体存在 的生物安全隐患的不足之处。

临床前研究中,重组仙台病毒载体在重度下肢缺血基因治疗制剂、阿耳茨海默 病(早老性痴呆症)疫苗、艾滋病疫苗都表现出了极好的治疗效果。由于仙台病毒载体的 基因表达水平很高,可望获得以往载体所不能实现的更好的治疗效果。此外,该载体即使是 较少剂量也可发挥相应的治疗效果,相比其他载体需要几十分钟以上的细胞接触才能获得 较满意的基因导入效果,重组仙台病毒载体仅在几分钟之内便可完成,在临床上可以减轻

患者及医生的負担,是一种非常快捷实用的载体。因此仙台病毒载体有比较广阔的应用前旦豕。

重组病毒在对于所有应用之前,都要在宿主细胞中增殖之后从宿主细胞中进行纯 化这一过程。 一般的方法包括细胞培养、感染宿主细胞、收获裂解宿主细胞、浓縮粗制裂解 物、核酶消化处理、以及进一步层析纯化。大多数改良的方法都集中在选用不同性质的层析 介质和超速离心。本发明是利用了仙台病毒蛋白的特点创造性的提出了新的纯化途径,其 过程是将收集的病毒初始液与来源于动物的红细胞在低温下混合一定的时间,然后在低温 条件下低速离心,收集沉淀;沉淀再用洗液洗涤,洗涤后的沉淀在37t:温浴一定的时间,然 后在室温条件下低速离心,收集上清液即为病毒纯品。收集的病毒纯品也可以选用相应的 层析介质做进一步的精纯化。

为更好的说明本发明的内容,对仙台病毒的结构做简单的介绍。

仙台病毒(Sendaivirus,SeV)属于副粘病毒科副粘病毒亚科、呼吸道病毒属病毒,为单股负链RNA病毒。RNA分子量4.76X106D,病毒粒子多是呈圆形,直径130?250nm。病毒内部由直径约18nm的螺旋状对称结构的核蛋白组成,外包有脂蛋白囊膜,其上有放射状排列的纤突,纤突长8X15nm,宽2X4nm

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