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美迪西生物医药

 
 
 

日志

 
 

浅析蛋白分离纯化的一般原则  

2018-05-14 09:43:58|  分类: 蛋白表达与纯化 |  标签: |举报 |字号 订阅

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蛋白质的分离纯化在生物化学研究应用中使用广泛,是一项重要的操作技术,也是目前的研究热点之一,目前我国也有不少医药研发外包服务公司提供了蛋白分离服务。美迪西生物医药是一家临床前医药研发外包服务公司,可以根据客户要求,承接从mg到kg级的化合物纯化分离服务。蛋白质的分离和提纯工作是一项艰巨而繁重的任务,但对任何一种蛋白质都有可能选择一套适当的分离提纯程序来获得高纯度的制品。蛋白的分离纯化应遵循以下原则:

1、总体原则 

(1)纯化前对样品的来源,目的蛋白的理化性质及生物活性要做充分了解。

 (2)纯化前明确纯化所要达到的目的及目标。

 (3)根据所要达到的目的在回收率,纯度,成本等之间合理取舍次要指标,把主要指标放在第一位。如科学研究,鉴定蛋白结构,纯度就是第一指标,回收率等次之。

2、纯化过程

    纯化每一步都充分利用目标蛋白和杂质成分理化性质差异。如大肠杆菌菌体蛋白大多是一些低分子量蛋白(<50000Da),且酸性蛋白较多。

3、纯化方法的选择

        根据蛋白理化特性选择分离材料和纯化方法,避免利用相同技术进行多次纯化;对纯化方法,及各种方法的适用性,各种方法的差异性做充分的了解。如排阻层析不适合用于分子量相差不到10%的样品的分离。


层析方法

亲和层析

凝胶过滤层析

离子交换层析

疏水层析

分离机制

特异性亲和

大小

电荷

疏水性

选择性

非常高

中等

高     中等

载量

纯化速度

中等

中等     低

生物相容性

非常好

中等     好

目标蛋白的得率

中等     高

捕获浓缩阶段

+++

+++

+++

中间纯化阶段

+++

+++

+++

精制纯化阶段

++

+++

+++


 

4、不同阶段突出重点

(1)纯化早期尽量减少样品处理体积,方便后续纯化,如目的蛋白在发酵液中,前期用盐析,膜过滤等方式去除大量的水分和小分子杂质。

 (2)纯化后期由于样品处理量和杂质量都已减少,可使用价格昂贵的高效分离材料进行精制,利于降低分离纯化成本,提高产品收率和纯度,实现工艺性价比最优化。

 

 

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