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裸鼠肿瘤模型建立方法简述  

2018-06-07 12:57:20|  分类: 动物模型 |  标签: |举报 |字号 订阅

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裸鼠肿瘤模型是比较常见和常用的一种肿瘤动物模型,它在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。裸鼠肿瘤模型的接种一般有细胞接种和瘤块接种两种方式,接种取材有手术活检标本、癌性胸腹水标本和体外培养的细胞系三种。

裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点,当然,这种肿瘤模型也有缺陷,即不能很准确的模拟正常人体肿瘤发生发展的过程。美迪西药理学服务可以为客户提供裸鼠成瘤、裸鼠皮下成瘤等试验来进行医药方面的研究。

1、裸鼠肿瘤细胞移植时的简要步骤

首先准备好要移植的肿瘤细胞(细胞量根据不同肿瘤略有不同,例如所用的前列腺癌细胞系每个移植点一般选择 1x106左右;肿瘤细胞可与基质胶 1:1 混匀后用 1 ml 注射器吸取,基质胶能够给肿瘤细胞提供营养环境,有助于肿瘤细胞生长)。

戴无菌手套后,将小鼠用左手大拇指和食指捏住颈部皮肤,然后将鼠尾用左手无名指和小指固定于左手大鱼际。将腋窝或腹股沟用 75% 酒精消毒 3 次。右手持吸有肿瘤细胞和基质胶混合液的注射器,在腹股沟或腋窝的位置,45 度斜角进针,注意不要突破腹膜,将针头保持于皮下位置。

然后近水平位置将针头几乎完全插入皮下,将混有基质胶的肿瘤细胞注射入皮下(肿瘤细胞量约 1x106),快速退针,左手食指轻压针孔约 1 min 后将小鼠放回饲养笼中,注意将小鼠侧放于垫料上,放置其不适呕吐时呕吐物误入呼吸道引起窒息。2~3 h 后观察小鼠是否苏醒。

如果是利用肿瘤组织(人体肿瘤标本或小鼠移植瘤传代)建立裸鼠皮下移植瘤模型,则需要首先将肿瘤组织用无菌 PBS(或 1640 培养基)洗涤 3 次,然后在无菌平皿上切成或用无菌剪刀剪成<1 mm3 体积的小块(种植前可裹基质胶)备用。

将小鼠用水合氯醛麻醉后平卧于解剖板上,四肢用胶带固定,将腋窝或腹股沟用 75% 酒精消毒 3 次,然后用眼科剪剪开约 0.5 cm 小口,小镊子将皮下筋膜与皮肤分开,然后将肿瘤组织放入贴近腹股沟或腋窝的深部,每个位置放置 2~3 块肿瘤组织,注意不同组间统一放置肿瘤组织块数以保持一致。

然后缝合皮肤,消毒后将小鼠侧卧位放置于饲养笼的垫料上。2~3 h 后观察小鼠是否苏醒。

2、裸鼠肿瘤模型肺原位成瘤方法介绍实验步骤:

(1)、准备足量细胞,将处于对数生长期的各实验组成瘤细胞胰酶消化后,完全培养基重悬成细胞悬液;

(2)、用血球计数板对细胞进行计数,并最终用一定体积基质胶重悬,使细胞悬液的浓度为 2E+7个细胞/ml(以2E+6/只接种量);

(3)、准备好肿瘤细胞后(2E+7/mL),使用一次性胰岛注射器,吸取细胞悬液,肺原位注射。每只100ul;

(4)、每周一次在活体成像仪下观察成瘤情况:按 10μl/g 的量腹腔注射D-Luciferin(15mg/mL),过 15分钟以后,使用活体成像仪器自带气体麻醉系统进行异氟烷气体麻醉,然后将 其放置于活体成像仪下进行成像,观察荧光,保存数据;

(5)、根据不同肿瘤细胞原位成瘤能力强弱不同适时结束实验,结束前对小鼠进行活体成像,方法同上。成像结束后,对实验动物进行注射过量2%液体麻醉剂(0.5mL)安乐致死,待其完全昏迷再进行颈椎脱臵确认死亡;

(6)、用医用剪刀和医用镊子解剖动物,观察其肺部及瘤体组织;使用游标卡尺测量瘤体长宽,计算肿瘤体积;使用精密天平称取瘤体及肺重量;

(7)、根据活体成像结果观察肝脏、淋巴、脾脏等其他器官组织,看是否有出现转移灶; 并取下进行观察;

(8)、将取出的肺、瘤体等器官组织,按照客户要求,放于4%多聚甲醛固定常温保存或液氮冷冻后-80°保存,以备送样。

小鼠实验肿瘤动物模型构建关键要细心,尤其是肿瘤细胞选择,肿瘤组织块处理上要仔细认真,这是影响模型成功建立的关键,还有移植手术时更要耐心细致,不要还没有建立就已经失败。

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