注册 登录  
 加关注
   显示下一条  |  关闭
温馨提示!由于新浪微博认证机制调整,您的新浪微博帐号绑定已过期,请重新绑定!立即重新绑定新浪微博》  |  关闭

美迪西生物医药

 
 
 

日志

 
 

肿瘤抑制子p53蛋白与人鼻咽癌的关系  

2018-07-05 15:11:06|  分类: western印迹分析 |  标签: |举报 |字号 订阅

  下载LOFTER 我的照片书  |
 

p53蛋白是是一种抑癌基因,基于p53蛋白开发抗癌药物,也一直是肿瘤研究的关注点。例如p53蛋白在人鼻咽癌中的表达及其临床意义的研究,采用western印迹分析方法结合免疫沉淀技术,检测鼻咽活检组织p53蛋白表达。最终得出的结论是鼻咽癌p53蛋白的异常表达多见于恶性程度较高,分期较晚,TgA/VCA滴度高和TgA/EA阳性的病例,提示p53 基因在鼻咽癌中可能发挥一定的作用。 

p53蛋白是一种转录因子,在细胞处于应激状态时可被诱导表达,从而促进细胞进入细胞周期的停滞阶段,继而凋亡或者衰老,调控细胞代谢通路,调控与胚胎植入过程相关的细胞因子表达等。野生型P53基因具有抑癌作用,突变型P53基因则为致癌基因,P53基因结构改变及表达异常是人类肿瘤中常见的现象之一。

一些数据显示,p53蛋白简直就是生物学领域里的“大腕”,在PubMed中,有关p53蛋白的文章就超过了5万篇,而且这个数字目前仍然以每周数篇的速度稳定增长。毫无疑问,由TP53基因编码的p53蛋白是生物学领域中研究热度最高的蛋白。上海美迪西的生物部在体外生物学领域有丰富广泛的经验,通过酶水平测定、细胞水平测定、细胞生物学、生物化学、体外同位素测定、稳定细胞株建立、基因敲除、RNAi和MicroRNA技术等,提供一套完整的生物学服务。

1、western印迹分析方法分析p53蛋白在人鼻咽癌中的表达步骤

(1)组织蛋白提取

标本来源于疑为鼻咽癌的初诊患者鼻咽纤维镜的检测标本,活体组织标本经病理检查确诊其中104例为鼻咽癌,8例为鼻咽粘膜慢性炎症。

活体组织取出后,在冰浴下用玻璃研磨器磨碎标本,然后加入细胞裂解液裂解细胞,超声波处理,离心,取上清,测总蛋白含量。

(2)免疫沉淀

用小鼠抗人p53单克隆抗体,根据抗体说明进行标本处理。p53抗体15μL与细胞裂解物1mL进行免疫沉淀。P53抗体是一种与Protein A Agarose 结合的小鼠抗p53单克隆抗体,可把裂解物中的p53抗原沉淀,形成抗原抗体复合物。P53靶蛋白沉淀后弃上清液,沉淀物经洗涤后加入强阴离子去污剂SDS加样缓冲液,使靶蛋白与抗体解离,然后用western印迹分析方法检出特异的p53蛋白。

(3)western印迹分析

已溶解与加样缓冲液的沉淀物进行SDS-PAGE(150g/L)电泳,电转移至硝酸纤维膜上,用1:30稀释p53抗体(小鼠抗人单克隆抗体),进行western blot,然后用1:300稀释的二抗(碱性磷酸酶偶联的抗小鼠IgG)处理,用DBA显色试剂盒检测、摄影。

检查结果发现,104例鼻咽癌活体组织中,12例出现p53蛋白表达异常条带,突变检出率为11.5%,8例鼻咽慢性炎症活检组织中p53蛋白表达未见异常。

2、为什么p53是一个重要的肿瘤抑制子

在癌症发展的过程中有两种重要的基因类型:癌基因和肿瘤抑制基因。当癌基因获得功能,比如通过突变时,其就会促进癌症发生,而关闭其功能的特殊药物常常能够用于多种类型癌症的治疗。从另一方面来讲,肿瘤抑制基因能够有效抵御肿瘤,但当其失去功能时,癌症就会继续发展。

p53蛋白是一种最重要的肿瘤抑制子,一方面p53在DNA出现损伤后能够引发细胞周期停滞或者消灭细胞,表明它可以通过预防致癌基因突变的累积来防止癌症发生。从这个角度来说,p53缺失会导致存活下来的子细胞中基因突变数目增多,从而间接地促进癌症的发生。另一方面,p53在致癌基因异常表达时能够阻止细胞增殖,表明它可能在限制致癌基因突变的恶果方面也有重要作用。在这种情况下,p53缺失会允许表达致癌基因的细胞继续无限制增殖,从而直接导致癌症发生。不管从哪个角度来说,p53都承担着基因组守护者的角色,它会限制基因突变带来的有害后果。

研究表明编码p53的蛋白质会在40%的癌症类型中发生突变,而剩下的癌症类型则会频繁寻找其它方式来促进p53功能失活;来自科罗拉多大学癌症研究中心的科学家Matthew Galbraith博士表示,p53基因的失活或关闭p53蛋白的功能都是肿瘤发生的关键,人们通常会采用药物不断关闭p53的表达,但到目前为止效果并不明显。

因此,利用p53治疗癌症一直是挑战。已知p53基因有多个突变,有超过1,000个其他基因受p53状态的影响,这增大了寻找抑制肿瘤途径的难度。

 

 

  评论这张
 
阅读(1)| 评论(0)
推荐 转载

历史上的今天

在LOFTER的更多文章

评论

<#--最新日志,群博日志--> <#--推荐日志--> <#--引用记录--> <#--博主推荐--> <#--随机阅读--> <#--首页推荐--> <#--历史上的今天--> <#--被推荐日志--> <#--上一篇,下一篇--> <#-- 热度 --> <#-- 网易新闻广告 --> <#--右边模块结构--> <#--评论模块结构--> <#--引用模块结构--> <#--博主发起的投票-->
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

页脚

网易公司版权所有 ©1997-2018